ELISA kiti, antijen veya antikorun katı fazına ve antijen veya antikorun enzim etiketlemesine dayanır. Katı taşıyıcının yüzeyine bağlanan antijen veya antikor, immünolojik aktivitesini hala korur ve enzim etiketli antijen veya antikor, hem immünolojik aktivitesini hem de enzim aktivitesini korur. Belirleme anında, test edilen numune (içinde antikor veya antijenin ölçüldüğü), katı taşıyıcının yüzeyinde antijen veya antikor ile reaksiyona girer. Katı taşıyıcı üzerinde oluşan antijen-antikor kompleksi yıkama ile sıvı içindeki diğer maddelerden ayrılır.
Katı taşıyıcıya reaksiyonla bağlanan enzim etiketli antijenler veya antikorlar eklenir. Bu sırada katı fazdaki enzim miktarı numunedeki madde miktarı ile orantılıdır. Enzim reaksiyonunun substratı eklendikten sonra, substrat enzim tarafından renkli ürünler haline gelmesi için katalize edilir. Ürün miktarı, test edilen maddenin numunedeki miktarı ile doğrudan ilişkilidir, bu nedenle rengin derinliğine göre kalitatif veya kantitatif analiz yapılabilir.
Enzimlerin yüksek katalitik etkinliği dolaylı olarak bağışıklık yanıtının sonuçlarını yükselterek tahlili oldukça hassas hale getirir. ELISA, antijenleri belirlemek için kullanılabileceği gibi, antikorları belirlemek için de kullanılabilir.
ELISA kitinin temel ilkeleri
Nesneyi enzime bağlamak için spesifik antijen ve antikor reaksiyonunu kullanır ve ardından kantitatif belirleme için enzim ve substrat arasında renk reaksiyonu üretir. Ölçüm nesnesi, antikor veya antijen olabilir.
Bu belirleme yönteminde gerekli olan üç reaktif vardır:
â Katı faz antijeni veya antikoru (immün adsorban)
â¡ Enzim etiketli antijen veya antikor (işaretleyici)
⢠Enzim eylemi için substrat (renk geliştirme ajanı)
Ölçümde, antijen (antikor) önce katı taşıyıcıya bağlanır, ancak yine de bağışıklık aktivitesini korur ve ardından orijinal bağışıklık aktivitesini ve enzimi hala koruyan bir antikor (antijen) ve enzim konjugatı (işaretleyici) eklenir. aktivite. Konjugat, katı taşıyıcı üzerindeki antijen (antikor) ile reaksiyona girdiğinde enzimin karşılık gelen substratı eklenir. Yani katalitik hidroliz veya REDOX reaksiyonu ve rengi.
Ürettiği rengin tonu, ölçülecek antijen (antikor) miktarı ile orantılıdır. Bu renkli ürün çıplak gözle, optik mikroskopla, elektron mikroskobuyla gözlemlenebilir, spektrofotometre (enzim etiket aleti) ile de ölçülebilir. Yöntem basit, kullanışlı, hızlı ve spesifiktir.